|
蛋白質是生命活動最重要的物質基礎之一，在寵物營養中占有特殊的地位，其發揮的重要生理作用是其他營養物質不可代替的。飼料產品中蛋白質的含量是評價飼料營養價值和確定飼料等級的重要指標之一，對該項指標進行定量測定是飼料品質分析中的重要內容。目前，飼料檢測工作中常用的蛋白質檢測方法包括凱氏定氮法、杜馬斯燃燒法、近紅外光譜法、納氏比色法、雙縮脲法、原子熒光分光光度計法等。
1凱氏定氮法
凱氏定氮法是測定化合物中蛋白質的經典方法，分為常量蒸餾法和半微量蒸餾法，其原理是先將樣品在混合催化劑(硫酸銅、硫酸鉀或硫酸鈉)的作用下，用濃硫酸消化樣品，使含氮物轉化成硫酸銨，在堿性條件下將銨鹽轉化為氨進而蒸餾出來，用過量的硼酸吸收并結合成硼酸銨，然后以甲基紅和溴甲酚綠作為混合指示劑，再用鹽酸標準溶液滴定，進而測定氮的含量，最后將結果乘以換算系數，從而計算出樣品中粗蛋白質的含量。該方法的操作步驟較為復雜，分析測定過程中易受多種因素的干擾，這些因素對測定結果的準確性均產生影響。
有學者對凱氏定氮法的注意事項和操作要點進行了探討。李萍對利用凱氏定氮法測定飼料中粗蛋白質過程中的消化﹑蒸餾、滴定步驟的注意事項進行了闡述;溫鐵巖等出了采用凱氏定氮法測定飼料中蛋白質含量的操作要點;范桂芝結合多年的實際工作經驗，總結了飼料中粗蛋白質檢測操作技術要點，提出了飼料中粗蛋白質的測定應注意樣品稱取、試樣液消化、蒸餾、滴定4個關鍵環節。
2杜馬斯燃燒定氮法
該方法是將樣品在燃燒管中進行燃燒處理(一般為800~1 200
℃)，而后經過一系列的反應，包括氧化、還原、吸收干擾氣體和鹽類等過程，樣品中的含氮物質被定量轉化成分子氮，通過熱導檢測儀檢測，得到飼料樣品中的氮含量，然后乘以換算系數，從而得到蛋白質的含量。
該方法的優點是檢測速度快、效率高，但由于杜馬斯定氮儀價格昂貴，導致單次檢測成本較高，不適合少量樣品的測定，同時，由于取樣量較少，不適合蛋白質濃度低的樣品的測定。樊霞等分別采用杜馬斯燃燒法和凱氏定氮法對10類植物源性飼料原料進行了粗蛋白質含量的測定，并對2種方法測定的粗蛋白質含量結果進行了比較分析，結果表明，除玉米蛋白粉以外，其他植物源性飼料原料的測定結果均不存在顯著性差異。
3近紅外光譜法
近紅外光譜分析技術是20世紀70年代興起的一種物質成分分析技術。近紅外光譜的波長范圍是780~2500 nm，通常分為近紅外短波區(780~1100
nm)和近紅外長波區(1100~2 500
nm)。一般情況下，近紅外光譜源于有機物中含氫基團，如OH、CH、NH、SH、PH等振動光譜的倍頻及合頻吸收，以漫反射方式獲得在近紅外區的吸收光譜，通過主成分分析、偏最小二乘法、人工神經網等化學計量學的手段，構建物質光譜與待測成分含量之間的線性或非線性模型，從而實現利用物質的近紅外光譜信息對待測成分含量的快速計算。
近紅外光譜法的優點有簡便、快速、高效、環保，但該方法也存在其固有的缺點：①由于測定的是倍頻及合頻吸收，因此靈敏度較差，一般要求檢測樣品中的蛋白質含量>1%;②建模難度較大，定標模型的適用范圍、基礎數據的準確性，即選擇計量學方法的合理性，都將直接影響最終的分析結果。
熊羅英等利用近紅外光譜法對豬料、蝦料、膨化料3種經不同工藝制成的顆粒料進行水分和粗蛋白質含量預測效果的研究，并分析不同加工工藝對該方法應用效果的影響。結果表明，近紅外光譜法能夠準確地預測3種飼料的水分和粗蛋白質含量，其中，豬料的水分定標模型效果最好，蝦料次之，最后是膨化料;蝦料的粗蛋白質定標模型效果最好，膨化料次之，豬料略差。
4納氏比色法
該方法首先采用凱氏定氮法中的消化步驟對樣品進行消化，然后利用氯化銨作為基準物，將得到的消化液稀釋到一定濃度后加入納氏試劑進行比色，利用氨態氮含量計算出飼料中粗蛋白質的含量。
納氏比色法的操作步驟較凱氏定氮法更為簡練。魏金濤等對納氏比色法和半微量凱氏定氮法測定飼料中粗蛋白質含量的應用效果進行了比較，結果表明，二者的測定結果差異不顯著，且納氏試劑的最佳添加量為1.5
mL，最佳顯色時間為10
min。周東凱等采用凱氏定氮法和納氏比色法對干酪素的含量進行測定，結果表明，凱氏定氮法與納氏比色法的測定結果平均值相對偏差僅為1.38%，在玉米秸秤中測定粗蛋白含量的最大相對偏差為2.94%
，均在允許范圍內。
5雙縮脲法
飼料中的蛋白質由多種氨基酸組成，各種氨基酸的氨基與羧基相互作用，形成可與雙縮脲反應的-CO-NH-基團。在堿性條件下，該基團能與硫酸銅作用，銅離子與肽鍵相配位形成一種含銅的環狀復合物，呈紫紅色。該化合物在540
nm處有吸收峰，其顏色深淺與蛋白質的濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸組成無關，因此，將飼料樣品用堿性溶液處理后，與雙縮脲試劑反應，測定反應液的吸光度值，然后在標準曲線上查出對應的蛋白質濃度值，即可得到樣品中蛋白質的含量。
張厚鋒等比較了雙縮脲法和凱氏定氮法測定飼料中蛋白質含量的應用效果，結果表明，2種方法的測定結果差異較大，雙縮脲法的測定結果比凱氏定氮法小17.3%
，而且結果不穩定，不適用于飼料(配合、濃縮)蛋白質含量的測定;利用雙縮脲法測定牛奶、豆汁、牛血清蛋白質含量與凱氏定氮法的測定結果較為接近，因為這些樣品中所含蛋白質溶解度較大，所含蛋白質種類相對較少，其性質與標準蛋白液接近。陳革對改良的雙縮脲法和凱氏定氮法測定飼料中蛋白質含量的應用效果進行了比較，結果表明，二者檢測結果差異不顯著，其認為改良雙縮脲法具有快速、準確、穩定等優點，具有一定的推廣價值。
6原子熒光分光光度計法
該方法的檢測原理為：將樣品消化液與濃堿混合，反應后產生的氨通過載氣帶出，經氣體吸收池吸收，以砷空心陰極燈為光源，通過測定其透光強度而測定出氮的質量分數。該方法具有自動化程度高等特點，適用于批量分析。姜能座等應用原子熒光分光光度計法對綠藻精粉等飼料原料中的蛋白質含量進行了測定，并將其測定結果與國家標準(GB/T14771—1993)推薦方法的測定結果進行了比較，發現2種分析方法的測定結果具有很好的一致性。
|
